Stérilisation

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Stérilisation

Messagepar zendair » 22 Nov 2010 12:55

Bonjour à tous,

Ca à l'air un peu hors sujet ici mais c'est la technique la plus essentielle en culture in vitro.

Alors voilà, je dois stériliser des pots contenant un liquide afin de réaliser des cultures in vitro de plantes.
Jusqu'à maintenant pas de problème, la cocotte minute faisait l'affaire : les couvercle des pots n'étaient pas vissés mais juste posés , un peu d'eau au fond de la cocotte et hop 30 minute a partir du sifflement (donc normalement à 112 °c).
Déjà première question, pourquoi les pots ne doivent pas toucher l'eau du fond de la cocotte? (de la même manière que dans les autoclave en labo)
Pourtant toutes les techniques de stérilisation que l'on peut trouver sur le net, il faut soit recouvrir les pots d'eau soit jusqu'à la moitié.

Par manque de place, je me suis rabattu sur les fameux stérilisateurs qui finalement ne sont rien d'autre qu'un immense récipient (27L) avec un système de chauffe en dessous et un couvercle au dessus. Mais pas d'augmentation de pression.

Comment puis-je procéder avec ce matériel?

Je ne veux pas fermer les pots a stériliser car le vide qui se créé à la fin de la stérilisation risque d'amener des micro-organismes lorsqu'il va se combler. Je ne peux donc pas dans un premier temps recouvrir les pots d'eau comme le suggère la plupart de nombreux site internet. Il faudra donc que cela se fera uniquement avec la vapeur.
J'imagine que le temps de stérilisation soit bien plus long (45 min à 90 °c suffira-t-il?).

Quelqu'un a-t-il déjà expérimenté ce type de stérilisation?
(ps: les cocotte minute d'un volume moindre 23 l coûtent 800 € !!!)

Merci d'avance

 
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Re: Stérilisation

Messagepar Ferréol » 22 Nov 2010 13:31

zendair a écrit:Déjà première question, pourquoi les pots ne doivent pas toucher l'eau du fond de la cocotte? (de la même manière que dans les autoclave en labo)


Ce n'est pas bon en partie parce que la paroi de l'appareil qui chauffe n'est pas à la même température que le système eau/vapeur d'eau qu'il contient. Il est plus chaud dans les phases de chauffe (risque de dégradation des milieux) et plus froid lors des phases de refroidissement (moins bonne stérilisation potentielle).

zendair a écrit:Pourtant toutes les techniques de stérilisation que l'on peut trouver sur le net, il faut soit recouvrir les pots d'eau soit jusqu'à la moitié.


C'est parce qu'en fait le plus souvent on devrait parler de pasteurisation plutôt que de stérilisation. Le plus souvent pour les conserves alimentaires "maison" on a pas besoin de stériliser au dessus de 100°C, température qui n'est pas très bonne pour les aliments (destruction des vitamines et modification du goût et de la texture), 75°C pendant je ne sais plus quelle durée permettant de diminuer d'un facteur 100 000 le nombre de germes.

zendair a écrit:Par manque de place, je me suis rabattu sur les fameux stérilisateurs qui finalement ne sont rien d'autre qu'un immense récipient (27L) avec un système de chauffe en dessous et un couvercle au dessus. Mais pas d'augmentation de pression.

Comment puis-je procéder avec ce matériel?

Je ne veux pas fermer les pots a stériliser car le vide qui se créé à la fin de la stérilisation risque d'amener des micro-organismes lorsqu'il va se combler. Je ne peux donc pas dans un premier temps recouvrir les pots d'eau comme le suggère la plupart de nombreux site internet. Il faudra donc que cela se fera uniquement avec la vapeur.
J'imagine que le temps de stérilisation soit bien plus long (45 min à 90 °c suffira-t-il?).

Quelqu'un a-t-il déjà expérimenté ce type de stérilisation?
(ps: les cocotte minute d'un volume moindre 23 l coûtent 800 € !!!)

Merci d'avance


Je crains que ce matériel ne soit pas adapté à la stérilisation du matériel de CIV, la température atteinte ne suffisant pas a détruire les spores de résistance de certaine bactéries (Bacillus subtilis par exemple).

Une solution qui pourrait convenir serait d'utiliser du matériel stérile jetable en plastique, de stériliser tes milieux en bouteilles d'1L dans ta cocotte minute et de couler tes milieux en conditions d'asepsie.

 
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Messagepar TCHEUB » 22 Nov 2010 13:36

+1 avec ferreol, oubli le sterilisateur.
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Messagepar zendair » 22 Nov 2010 14:02

Merci beaucoup pour ces réponses rapides.

C'est ce que je pensais malheureusement.... Mais il y a tout de même quelque chose qui me surprend. Sur la notice d'emploi on peut voir que pour les viande par exemple le temps de stérilisation/pasteurisation est très longue : dû en partie à la fragilité de l'aliment face aux germes. C'est quelque chose comme 1h30 pour une temp d'environ 100°c. Pourquoi la CIV mériterai d'avoir des conditions plus stérile que pour les aliments? Et si j'appliquai le même procédé?

Après tout 100° c'est moins chaud que 112 ° et donc moins susceptible de détruire les vitamine du milieu de CIV, quoique qu'avec la durée.....

Je vais tout de même faire quelque test.... Je n'ai pas accès à du matériel stérile, et j'aimerais faire dans de grands objets. Et je n'ai pas les moyens pour une grande cocotte.


Je viens de tomber là-dessus :

- Un chauffage de 30 minutes à 100°C par ébullition ou un maintien dans la vapeur d'eau bouillante suffit à détruire toutes les formes végétatives. Dans ces conditions les spores ne sont pas détruites : on peut améliorer à ce moment là l'efficacité de l'ébullition en ajoutant à l'eau des solutions salines concentrées ( augmentation du point d'ébullition ) ou en prolongeant le chauffage.

- A utiliser pour la stérilisation des produits liquides délicats : milieux albumineux, lait, gélatine, solutions concentrées de glucides, ...


Je pourrait mettre du sel dans l'eau du stérilisateur pour augmenter l'ébullition à 108 °C, on se rapproche :roll:


Je possède en outre un stérilisateur à chaleur sèche :
- Les spores et germes sont détruits en chaleur sèche, par un chauffage de : 4 heures à 140 °C ; 2 heures 30 à 160°C ; 30 min à 180°C


Je ne sais pas si les petits pots de bébé peuvent supporter de tels conditions.. (surtout pour les couvercle revêtu d'un espèce de caoutchouc...)

 
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